DNA-Fingerprint
= Analyse von kurzen DNA-Abschnitten (Mikrosatelliten)
- Basensequenzen sind individuell -> dadurch identifizierbar
Schritte
- Schneiden der Proben mit einem bestimmten Restriktionsenzym
- Restriktionsfragmentlängen
- Auftrennung durch Gelektrophorese (siehe Gelekektrophorese)
- Denaturieren -> Einzelsränge
- Stempel mit Mikrocellulose
- DNA-Sonde zum sichtbar machen
- Vergleich des Bandenmusters
DNA-Sequenzierung + Kettenabbruch
= Bestimmung der genauen Nukleotidfolge im Stück einer DNA
Schritte der Kettenabbruch Methode
- Klonieren des DNA-Moleküls (z.B. das Gen), das sequenziert werden soll
- Mit M13: Klonierungsvektor
- Aus Phagen lassen sich einzelsträngige DNA isolieren
- Primer lagert sich an das rekombinierte M13
- Für Synthese durch die Polymerase
- Reaktionsstart durch Zugabe der Polymerase und vier Desoxynukleotidphosphate und ein einzelnes modifiziertes Nukleotid (das Desoxynukleotidtriphosphat, stoppt die Synthese an der Stelle)
- Erreicht die Polymerase das Disoxynukleotidtriphosphat, kommt es zum Kettenabbruch
- Je nach eingefügtem Stop-Nukleotid kommt die Polymerase an unterschiedlichen Stellen zum stoppen.
- In der Gelekektrophorese lassen sich die Stränge nach Länge sortieren. Die Stopp-Nukleotide sind sichtbar.
- Von unten nach oben abgelesen erhält man den komplementären Strang
![](https://calify.net/wp-content/uploads/2023/05/image-1024x442.png)
Gelelektrophorese
![](https://calify.net/wp-content/uploads/2023/05/Bildschirmfoto-2023-05-29-um-17.07.14-1024x468.png)
Insulin Herstellung
- Aus der Bauchspeicheldrüse wird mRNA isoliert
- Reverse Transkriptase wandelt mRNA in DNA (genannt cDNA)
- Künstliches Gen
- Die künstlichen Gene für die A- und B-Kette des Insulins werden so in ein E. Coli-Plasmid eingeführt, dass sie an ein Gen für das Enzym β-Galaktosidase mit Promotor anschließen
- Plasmide werden in E. Coli eingeschleust, dort vermehrt
- Synthese von β-Galaktosidase + A-Kette und β-Galaktosidase + B-Kette
- β-Galaktosidase bei beiden Ansätzen entfernt, übrig bleibt A- und B-Kette
- A- und B-Kette zusammengeführt ergeben Insulin
PCR (=Polymerase Chain Reaction)
=Gezielte vervielfältigung von DNA-Abschnitten
- Auftrennung der zu vermehrenden doppelsträngigen DNA-Proben bei 95 °C in Einzelstränge (Denaturierung)
- Anlagerung von DNA-Primern nach Abkühlung
- Synthese neuer DNA-Stränge
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